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蛋白純化

德泰生物可以提供大規模蛋白純化、融合標簽蛋白純化、無標簽蛋白純化等多種蛋白純化技術服務。同時也提供蛋白純化樹脂及預裝柱。我們提供的詳細蛋白純化服務有:

重組蛋白純化

德泰可提供多種蛋白純化服務,滿足客戶的不同需求,如需要無標簽的純化蛋白用于結構分析,需要將自然界獲取的天然蛋白純化,需要克級或千克級以上的可溶性蛋白等。具體服務內容如下:

可溶蛋白純化服務
可溶性蛋白表達純化
客戶提供蛋白序列,德泰優化及基因合成,表達純化獲得可溶性蛋白
無標簽蛋白純化服務
無標簽蛋白服務
全面分析蛋白性質,結合分子篩、離子柱、疏水色譜,綜合制定純化方案
內毒素去除及檢測
內毒素去除與檢測
內毒素定性和半定量分析,交付低內毒素重組蛋白
抗體純化服務
抗體純化
重組抗體純化,及單抗多抗純化,最終交付>90%純度抗體
大規模蛋白表達純化服務
大規模蛋白表達純化
高密度發酵技術,適合工業級蛋白大量生產,同時可進行工藝流程優化。
蛋白復性服務
蛋白復性
根據大腸桿菌密碼子組成優化基因序列,提高表達成功率。

蛋白純化服務優勢

先進的AKTA純化系統和全套預裝純化柱,適合純化不同來源的重組蛋白或天然蛋白多種蛋白純化系統(親和色譜、離子交換、分子篩、疏水色譜、HPLC等)提供全面的蛋白純化分析報告和蛋白質量檢測報告。
蛋白純化實驗流程:
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蛋白純化方法

我們的純化策略側重于在提高蛋白純度的同時減少蛋白表達量的損失。因此我們常采用多種純化方式混合純化的方法,常用的純化方法有:

純化方法 簡述
親和純化 利用目的蛋白與其特異性配體之間的親和力分離蛋白
離子交換色譜法 將離子交換劑與目的蛋白的電荷結合,通過改變PH或增加離子強度的緩沖液洗脫目的蛋白
凝膠過濾色譜法 主要依據蛋白質分子量和分子形狀進行分離
疏水色譜法 利用蛋白與疏水配體綁定的可逆作用進行分離純化
高效液相色譜法 與傳統的液相色譜柱相比,具有分離效能高,檢測靈敏度高、分析速度快等優勢

我們交付的蛋白默認保存在Tris緩沖液中,如果客戶對蛋白保存條件有要求,我們還可提供其他緩沖液或凍干服務。

查看全文:蛋白純化專題

親和純化技術

親和純化是利用待分離物質和它的特異性配體間的特異親和力,達到分離目的的一類純化技術。這里主要介紹His/GST親和純化原理和實驗步驟(流程)。

凝膠過濾色譜(分子篩)純化技術

凝膠過濾色譜又稱分子篩,蛋白純化方式之一。是應用蛋白質分子量或分子形狀的差異去進行分離的一項純化技術。

離子交換色譜

離子交換色譜是利用離子交換劑上的可交換離子與周圍介質中被分離的各種離子間的親和力不同,經過交換平衡達到分離目的的一種純化方法。

蛋白純化標簽選擇

蛋白表達純化時標簽的選擇對蛋白會產生一定影響,如表達量,可溶性及蛋白的下游應用。本文主要分析了幾種常用標簽的優缺點和適用性。

蛋白純化方法選擇

蛋白純化的方法主要有四種,選擇合適的純化方法有助于獲得更好的蛋白,本文主要從蛋白的性質入手,指導實驗選擇合適的蛋白純化方法。

蛋白純化經驗總結

蛋白純化是蛋白表達實驗中的重要一步,蛋白純化有不少技術難點,本文主要是根據經驗總結蛋白純化的相關問題并提出解決方法。

蛋白純化案例介紹

蛋白純化案例

無標簽蛋白多步純化 – 目標蛋白 Protein V1 (~14.7Kd), 雜蛋白 (~10Kd)
Lane 1: 初步純化后的目標蛋白與雜蛋白,靠的很近
Lane 2 – 15: 經過離子柱,分子篩與疏水柱,多重純化,目標蛋白被分離
該項目難點: 無標簽蛋白,雜帶與目的蛋白靠的很近

查看全文:蛋白純化FAQ

蛋白表達為包涵體的情況并不少見,尤其是在大腸桿菌蛋白表達系統中,80%的蛋白都會形成包涵體。復性的難點在于復性條件的摸索與試劑的選用,德泰的蛋白復性服務會通過篩選多種復性條件,確保蛋白正確折疊,保證交付蛋白的可溶性。
如果客戶的蛋白無法正常折疊,我們推薦選用上清優化型原核蛋白表達服務。該服務可以將目的蛋白表達在上清液里,能夠獲得更高的天然活性和純度。

包涵體蛋白純化,如何復性?

  1. 包涵體蛋白純化方法一:透析復性
  2. >收集變性的A蛋白,將其濃度控制在x mg/ml,共計x ml,用離心機離心:13000r/min x 15min , 溫度為4℃,離心結束后留上清。
  3. 將上清其裝入已經預處理好的透析袋中(截留分子量為3.5KDa),將蛋白按照體積比為1/10至1/15透析至xml的復性緩沖液(氧化還原系統:GSH/GSSG)中,時間為x小時,溫度為4℃。

包涵體蛋白純化方法二:稀釋復性

  1. 收集變性的x蛋白,將其濃度控制在x mg/ml,共計x ml,用離心機離心:13000r/min x 15min , 溫度為4℃,離心結束后留上清。
  2. 將上清按終濃度為x mg/ml稀釋至x ml復性緩沖液(氧化還原系統:GSH/GSSG)中,時間為x小時,溫度為4℃。
  3. 稀釋復性結束后,將含有蛋白的復性緩沖液離心:13000r/min x 15min , 溫度為4℃,離心結束后留上清。
  4. 將上清通過xx層析的方法與X柱子結合,用非變性的洗脫緩沖液洗脫收集蛋白。
  5. 將符合要求的蛋白將其濃度控制在x mg/ml,共計x ml,用離心機離心:13000r/min x 15min , 溫度為4℃,離心結束后留上清。
  6. 將上清其裝入已經預處理好的透析袋中(截留分子量為3.5KDa),將蛋白按照體積比為1/10至1/15透析至xxml的儲存緩沖液)中,時間為xx小時,每x小時換液一次,溫度為4℃。
  7. 透析結束后,將蛋白取出離心:13000r/min x 15min , 溫度為4℃,離心結束后留上清,并用濾頭抽濾(直徑為0.22um)后分裝,并將其凍存至-80℃,(需要凍干的,再用凍干機凍干) 等待檢測。

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